Phương pháp thử nghiệm để phát hiện Bacillus subtilis
B. subtilis
vi khuẩn Bacillus subtilislà một loại vi sinh vật phổ biến thường được sử dụng trong ngành thức ăn chăn nuôi, cụ thể là sản xuất và cũng như là một chất phụ gia sau khi sản xuất. Việc phát hiện ra nó rất quan trọng để đảm bảo chất lượng và an toàn của thức ăn chăn nuôi. Sau đây sẽ cung cấp phần giới thiệu chi tiết về các phương pháp phát hiện, điều kiện và tiêu chuẩn thử nghiệm khác nhau chovi khuẩn Bacillus subtilistrong nguồn cấp dữ liệu. Mỗi phương pháp đều có ưu và nhược điểm riêng, do đó người dùng phải tính đến tình huống và kịch bản cụ thể của ứng dụng.
Phương pháp canh tác truyền thống
Xử lý mẫu: Cân một lượng mẫu nhất định, thêm chất pha loãng để trộn và xử lý siêu âm để đảm bảo giải phóng và phân tánvi khuẩn Bacillus subtilis.
Pha loãng: Pha loãng mẫu đã xử lý theo phương pháp gradient để đảm bảo rằng mỗi độ pha loãng của mẫu có thể được phủ đều trên môi trường nuôi cấy.
Tiêm chủng: Cho mẫu đã pha loãng vào đĩa thạch dinh dưỡng, ghi số phân tích, ngày tháng và mức độ pha loãng.
Nuôi cấy: Đặt các đĩa đã cấy vào tủ ấm nhiệt độ không đổi 37℃ trong 16-20 giờ và quan sát sự phát triển của các khuẩn lạc vi khuẩn.
Quan sát đặc điểm của đàn: Các đàn củavi khuẩn Bacillus subtilisthường có hình dạng thô và không đều trên môi trường nuôi cấy rắn, với các khuẩn lạc lớn hơn có màu trắng sữa đến trắng xám.
Nhận dạng sinh hóa: Thông qua một loạt các xét nghiệm sinh hóa như xét nghiệm oxidase, xét nghiệm enzym xúc tác, xét nghiệm hóa lỏng gelatin và xét nghiệm khử nitrat, xác nhận thêm xem vi khuẩn được phân lập cóvi khuẩn Bacillus subtilis.
Phương pháp sinh học phân tử
Phát hiện PCR: Sự hiện diện củavi khuẩn Bacillus subtilisđược phát hiện bằng cách khuếch đại trình tự gen đặc hiệu của nó thông qua phản ứng chuỗi polymerase (PCR). Phương pháp này có độ nhạy cao và độ đặc hiệu mạnh, nhưng đòi hỏi thiết bị đắt tiền và kiến thức chuyên môn.
PCR định lượng huỳnh quang (qPCR): Phát hiện định lượng sự hiện diện củavi khuẩn Bacillus subtilisbằng cách khuếch đại các trình tự gen cụ thể, với độ nhạy và độ đặc hiệu cao, nhưng cũng đòi hỏi thiết bị chuyên nghiệp và kiến thức vận hành.
Phương pháp miễn dịch học
Xét nghiệm miễn dịch liên kết với enzyme (ELISA): Phản ánh gián tiếp nội dung củavi khuẩn Bacillus subtiliskháng thể đặc hiệu trong mẫu bằng cách phát hiện phản ứng liên kết của chúng với kháng nguyên. Phương pháp này có độ nhạy cao, nhưng có thể bị ảnh hưởng bởi chất lượng thuốc thử và quy trình thử nghiệm.
Phương pháp hạt từ tính miễn dịch: Sử dụng hạt từ tính miễn dịch để bắt giữ cụ thểvi khuẩn Bacillus subtilisvà sau đó thực hiện phát hiện. Phương pháp này cũng có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, nhưng thao tác phức tạp hơn.
