Phương pháp phát hiện hoạt tính protease kiềm là gì?
Phương pháp phát hiện hoạt tính protease kiềm là gì?
Hoạt động của enzym đề cập đến khả năng của một enzym xúc tác các phản ứng hóa học nhất định. Kích thước hoạt động của enzyme có thể được biểu thị bằng tốc độ của một phản ứng hóa học nhất định mà nó xúc tác trong các điều kiện tương ứng. Đo hoạt động của enzyme protease kiềm Liêu Ninh thực sự là đo tốc độ của phản ứng hóa học được xúc tác bởi enzyme. Tốc độ của phản ứng enzyme có thể được biểu thị bằng sự giảm chất nền phản ứng hoặc tăng sản phẩm trên một đơn vị thời gian. Vì mục đích nhạy cảm, lượng sản phẩm được sản xuất trên một đơn vị thời gian thường được đo. Vì tốc độ của phản ứng enzym có thể giảm dần giá trị tăng dần theo thời gian nên để đo chính xác hoạt tính của enzym, phải xác định tốc độ ban đầu của phản ứng enzym.
Nguyên lý xác định hoạt tính Protease kiềm Nguyên lý của phương pháp Folin
Protease kiềm có thể xúc tác quá trình thủy phân casein thành tyrosine trong điều kiện kiềm. Tyrosine là một axit amin chứa một nhóm hydroxyl phenolic và có thể phản ứng với Folin (hỗn hợp axit photphotungstic và axit photphomolybdic). (Phản ứng Folin phenol: Thuốc thử Folin cực kỳ không ổn định trong điều kiện kiềm và rất dễ bị khử bởi các hợp chất phenolic để tạo ra hỗn hợp màu xanh vonfram và màu xanh molypden, cho thấy màu xanh khác nhau. Lượng tyrosine được tạo ra có thể được xác định và lượng tyrosine được tạo ra từ quá trình thủy phân casein bằng protease kiềm Liêu Ninh trong một đơn vị thời gian được sử dụng để biểu thị hoạt tính của enzyme, từ đó tính hoạt tính của enzyme.
Quy trình thí nghiệm xác định hoạt tính của protease kiềm
Chuẩn bị dung dịch enzyme: cân chính xác 1g (± 0,001) bột enzyme khô, thêm 10mL dung dịch đệm (2.2.5), hòa tan trong cốc nhỏ và khuấy bằng đũa thủy tinh. Sau khi đứng một lúc, cẩn thận đổ dung dịch lớp trên vào bình định mức Ở giữa, thêm một lượng nhỏ dung dịch đệm vào phần trầm tích, khuấy và hòa tan 4 lần theo cách này, và cuối cùng chuyển tất cả vào bình định mức 100mL . Thêm dung dịch đệm đến vạch, lắc đều và lọc bằng gạc bốn lớp. Hút 5mL dịch lọc, chuyển vào bình định mức 100mL, pha loãng bằng nước cất đến vạch mức, pha loãng dịch enzyme với mức 2000 lần.
Định nghĩa hoạt tính protease kiềm
Định nghĩa về đơn vị hoạt động của protease kiềm: 1 gam bột protease kiềm có thể tạo ra 1 microgram tyrosine mỗi phút ở điều kiện pH10 và 40 ° C, được coi như một đơn vị hoạt động của enzyme.
Thận trọng khi xác định hoạt tính protease kiềm
1. Nhiệt độ, pH và thời gian của phản ứng enzyme có tác động trực tiếp đến số lượng liên kết peptide bị thủy phân, do đó nó phải được kiểm soát chặt chẽ.
2. Sau khi kết thúc phản ứng với axit tricloaxetic, nước lọc thu được khi lọc hỗn hợp phản ứng phải trong.
3. Vì thuốc thử Folin nhạy cảm với môi trường axit và dễ bị thay đổi nên có quy định về thứ tự trong quá trình đo. Cần thêm dung dịch natri cacbonat để tạo thành môi trường kiềm, sau đó thêm thuốc thử Folin để làm cho nó hoạt động bình thường.
Trên đây là những bài viết liên quan về protease kiềm mà tôi đã chia sẻ cho bạn. Nếu bạn muốn biết các bài viết liên quan khác về protease kiềm, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi.
