Phương pháp phát hiện hoạt động của protease kiềm là gì?
Phương pháp là gì? Protease kiềm phát hiện hoạt động?
Hoạt động của enzyme đề cập đến khả năng của một enzyme xúc tác một số phản ứng hóa học nhất định. Quy mô của hoạt động của enzyme có thể được thể hiện bằng tốc độ của một phản ứng hóa học nhất định mà nó xúc tác trong các điều kiện tương ứng. Đo lường hoạt động của LiaoningProtease kiềmenzim thực chất là đo tốc độ phản ứng hóa học do enzim xúc tác. Tốc độ phản ứng enzim có thể được biểu thị bằng sự giảm của chất nền phản ứng hoặc sự tăng của sản phẩm trên một đơn vị thời gian. Vì mục đích nhạy cảm, lượng sản phẩm được tạo ra trên một đơn vị thời gian thường được đo. Vì tốc độ phản ứng enzim có thể giảm dần giá trị tăng của nó theo thời gian, để đo chính xác hoạt động của enzim, tốc độ ban đầu của phản ứng enzim phải được xác định.
Nguyên tắc củaProtease kiềmNguyên lý xác định hoạt động của phương pháp Folin
Protease kiềmcó thể xúc tác quá trình thủy phân casein thành tyrosine trong điều kiện kiềm. Tyrosine là một axit amin chứa nhóm hydroxyl phenolic và có thể phản ứng với Folin (hỗn hợp axit phosphotungstic và axit phosphomolybdic). (Phản ứng phenol Folin: Thuốc thử Folin cực kỳ không ổn định trong điều kiện kiềm và dễ bị khử định lượng bởi các hợp chất phenolic để tạo ra hỗn hợp xanh vonfram và xanh molypden, cho thấy sắc thái xanh khác nhau.) Sử dụng phép đo màu Tức là có thể xác định được lượng tyrosine được tạo ra và lượng tyrosine được tạo ra bởi quá trình thủy phân casein của Liêu NinhProtease kiềmtrong một đơn vị thời gian được sử dụng để biểu thị hoạt động của enzim, từ đó tính toán được hoạt động của enzim.
Quy trình thử nghiệm để xác địnhProtease kiềmhoạt động
Chuẩn bị dung dịch enzyme: cân chính xác 1g (±0,001) bột enzyme khô, thêm 10mL dung dịch đệm (2.2.5), hòa tan trong cốc thủy tinh nhỏ và khuấy bằng đũa thủy tinh. Sau khi để yên một lúc, cẩn thận đổ dung dịch lớp trên vào bình định mức. Ở giữa, thêm một lượng nhỏ dung dịch đệm vào phần lắng, khuấy và hòa tan 4 lần theo cách này và cuối cùng chuyển tất cả vào bình định mức 100mL. Thêm dung dịch đệm đến vạch, lắc đều và lọc bằng bốn lớp gạc. Rút 5mL dịch lọc, chuyển vào bình định mức 100mL, pha loãng đến vạch bằng nước cất và pha loãng dung dịch enzyme với mức 2000 lần.
Định nghĩa củaProtease kiềmhoạt động
Định nghĩa củaProtease kiềmđơn vị hoạt động: 1 gamProtease kiềmBột có thể sản xuất 1 microgam tyrosine mỗi phút trong điều kiện pH10 và 40°C, được coi là một đơn vị hoạt động của enzyme.
Các biện pháp phòng ngừa để xác địnhProtease kiềmhoạt động
1. Nhiệt độ, pH và thời gian phản ứng của enzyme có ảnh hưởng trực tiếp đến số liên kết peptide bị thủy phân nên phải kiểm soát chặt chẽ.
2. Sau khi kết thúc phản ứng bằng axit trichloroacetic, dịch lọc thu được khi lọc hỗn hợp phản ứng phải trong.
3. Vì thuốc thử Folin nhạy cảm với môi trường axit và dễ bị thay đổi, nên có quy định về thứ tự trong quá trình đo. Cần thêm dung dịch natri cacbonat để tạo thành môi trường kiềm, sau đó thêm thuốc thử Folin để hoạt động bình thường.
Trên đây là những bài viết liên quan về protease kiềm mà tôi đã chia sẻ cho các bạn. Nếu bạn muốn biết thêm những bài viết liên quan khác vềProtease kiềm, vui lòng liên hệ với chúng tôi.
